MOLLA GIANLUCA | Università degli studi dell'Insubria

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Gianluca Molla si è laureato presso Università degli Studi di Milano (Italia) e ha conseguito il dottorato in Biologia Evoluzionistica e dello Sviluppo presso la stessa università nel 1999. Dopo un periodo presso l’Università di Konstanz (Germania), Gianluca Molla ha intrapreso la carriera di ricerca presso il laboratorio di biochimica dellUuniversità dell’Insubria assumendo il ruolo di ricercatore nel 2002 e di professore associato nel 2016 (BIO/10). Dal 2019 è Presidente del Corso di Laurea in Biotecnologie Molecolari e Industriali.

Nel corso della sua carriera professionale, Gianluca Molla si è interessato allo studio del rapporto struttura/funzione in proteine enzimatiche utilizzando approcci di biochimica classica, enzimologia (cinetica rapida) e indagini computazionali (dinamica molecolare e docking molecolare). Le proteine studiate sono di interesse biomedico (coinvolte in patologie umane) e biocatalitico (produzione di molecole di interesse biotecnologico). Recentemente Gianluca Molla si interessa di enzimi in grado di eliminare polimeri plastici dall’ambiente.

Gianluca Molla si e’ occupato di organizzare numero convegni nazionali ed internazionali ed è membro della Società Italiana di Biochimica e Biologia Molecolare e del Collegio Docenti del Dottorato in Dottorato in Biotecnologie, Bioscienze e Tecnologie Chirurgiche (Università dell'Insubria, Varese).

Gianluca Molla ha partecipato a 11 progetti (9 come "principal investigator") di diverse agenzie (MIUR, Regione Lombardia, Fondazione Cariplo, etc.). È stato inoltre consulente per diverse aziende biotecnologiche: ACS DOBFAR, Antibioticos, Farmaopera, Ingenza, UK. Inoltre, è stato titolare di 4 contratti di ricerca (2017-2018).

Il Prof. Molla è autore di più di 75 pubblicazioni sulle maggiori riviste internazionali nel campo della biochimica, della biologia molecolare e strutturale e delle biotecnologie. H-index complessivo pari a 29 (2259 citazioni totali, fonte: Web of Science, gennaio 2019). Considerando gli ultimi 10 anni (2008-2017), l’H-index è pari a 16, un valore che si posiziona nel top 15% delle pubblicazioni dei professori associati appartenenti al Settore Scientifico Disciplinare BIO/10.

Gianluca Molla è autore di 1 brevetto e più di 150 comunicazioni a congressi nazionali ed internazionali.

Gianluca Molla ha partecipato a più di 25 convegni, con 15 interventi orali (di cui 9 come invited speaker).

Ricerca

CURRICULUM VITAE ET STUDIORUM di Molla GIANLUCA

Argomenti di Ricerca

L’attività scientifica del Dr. Molla Gianluca è documentata dalle pubblicazioni delle quali riporta (da pag 9 a pag 18 di questo curriculum) l’elenco completo: 20 pubblicazioni su libri, 41 articoli su riviste internazionali, 73 comunicazioni a congresso e 7 comunicazioni orali a congressi. I temi generali intorno ai quali il Dr. Molla ha lavorato e lavora attualmente riguardano il rapporto tra struttura e funzione di proteine enzimatiche, la determinazione di meccanismi cinetici e chimici di flavoproteine ossidasi, il rapporto tra alcune flavoproteine umane e patologie e l’impiego biotecnologico di enzimi per la produzione di intermedi di antibiotici e di altri composti di interesse biomedico.

Le ricerche sono state centrate su ossidasi flaviniche, in particolare gli enzimi D-aminoacido ossidasi, colesterolo ossidasi e glicina ossidasi e proteine correlate a patologie umane quali l’RNAse 6P, la L-pipecolato ossidasi, la D-aminoacido ossidasi umana e la proteina G72; recentemente è stato proposto che queste ultime due proteine possano essere correlate all’insorgenza della schizofrenia.

a) L’enzima D-amino acido ossidasi (EC 1.4.3.3, DAAO) è stato purificato per la prima volta all’omogeneità ed in forma stabile da un microorganismo, il lievito Rhodotorula gracilis (M. Pilone Simonetta, 1989). Il Dr. Molla si è occupato del clonaggio del cDNA per l’enzima DAAO da R. gracilis (che è il secondo gene clonato da questo lievito la cui genetica è ignota ed il cui codon-usage è particolare), e della sua overespressione in E. coli. Successivamente ha preparato una serie di mutanti puntiformi dei residui presenti nel sito attivo (anche in base ai dati ottenuti dalla struttura 3D, vedi oltre): Y223 (F e S), Y238 (F e S), S335 (G e H), R285 (K, Q, D e A), Q339 (N e E) M213R. I risultati della loro caratterizzazione spettrale e cinetica (allo stato stazionario e pre-stazionario) complementano quelli ottenuti dalla risoluzione della struttura 3D, nel senso che nessuno di questi residui è fondamentale nella catalisi, ma giocano un ruolo importante nel legame del substrato e nel preciso orientamento dello stesso rispetto al FAD.

Presso l’Università di Costanza (Germania), il Dr. Molla si è occupato autonomamente della cristallizzazione e, in collaborazione con il Dr. S. Umhau, il Prof. S. Ghisla e il Prof. S. Welte, della risoluzione della struttura 3D dell’enzima. Le informazioni strutturali così ottenute sono state estremamente importanti nel chiarire ulteriormente il meccanismo preciso di reazione.

E’ stata determinata la struttura dell’enzima ossidato in complesso con D-trifluoroalanina, L-lattato ed antranilato e dell’enzima ridotto in complesso con il substrato D-alanina, fino ad una risoluzione di 1.2 Å, allora (1998) la struttura a più alta risoluzione depositata in banca dati per un enzima di quelle dimensioni (40 kDa il monomero). L’elevata risoluzione (e la determinazione della struttura del complesso con D-trifluoroalanina e D-alanina, che corrispondono al complesso di Michaelis) ha permesso di entrare nel dettaglio del meccanismo di catalisi. Infatti il legame aC-H si trova esattamente nell’estensione dell’orbitale LUMO della posizione N5 del FAD, si sovrappone con esso e direttamente conduce ai prodotti iminoacido e FAD ridotto. Ciò conferma il meccanismo a trasferimento di idruro precedentemente proposto, e rappresenta un esempio di meccanismo in cui l’Orbital Steering è il fattore determinante nella catalisi, come recentemente proposto da Koshland.

b) Ingegnerizzazione del sito attivo della DAAO da R. gracilis per alterarne la specificità di substrato.. Il Dr. Molla si è occupato dell’ingegnerizzazione dell’enzima DAAO da lievito per ottenere una forma enzimatica con una specificità di substrato più ampia; ciò al fine di comprendere la modulazione della specificità di substrato in questo enzima e di identificare varianti enzimatiche più adatte per un impiego biotecnologico (per esempio utilizzabili per la costruzione di un biosensore adatto alla determinazione della concentrazione di D-aminoacidi in fluidi organici). La costruzione dei mutanti è avvenuta sia con tecniche di mutagenesi sito-specifica che con “screening” di librerie di mutanti ottenuti attraverso “random mutagenesis”.

c) Il Dr. Molla ha partecipato, in misura minore, ad alcuni progetti riguardanti l’enzima colesterolo ossidasi. L’enzima colesterolo ossidasi (EC 1.1.3.6, CO) è un altro importante membro della classe deidrogenasi/ossidasi delle flavoproteine. La CO catalizza il primo passaggio della degradazione del colesterolo in numerosi batteri del suolo. Sebbene la struttura 3D della CO da Brevibacterium colesterolicum sia stata risolta già nel 1991 e quest’enzima sia ampiamente utilizzato in campo biotecnologico e clinico, questa flavoproteina è poco caratterizzato, soprattutto per la difficoltà di misurarne efficientemente l’attività enzimatica a causa della bassa solubilità dei suoi substrati, e.g. il colesterolo. Dal 1999 il Dr. Molla ha quindi cominciato una serie di studi su una CO da Brevibacterium colesterolicum (BCO, diversa da quella cristallizzata perchè possiede il coenzima FAD legato covalentemente in posizione 8 attraverso un residuo di His) ed una CO da Streptomyces hygroscopicus (SCO, avente il coenzima non legato covalentemente). In particolare progetto di ricerca si proponeva di comprendere il significato evolutivo e funzionale del legame covalente del coenzima in BCO rispetto alla SCO. Ciò si sta studiando grazie all’ottenimento di un mutante puntiforme della BCO (H69A) privo del legame covalente con il coenzima. I risultati sono stati estremamente significativi, poichè hanno dimostrato che il legame covalente non serve per ottenere un legame stabile del coenzima, nè una maggiore stabilità conformazionale, bensì serve per modulare le proprietà redox del coenzima e quindi la reattività dell’enzima stesso.

d) La glicina ossidasi da Bacillus subtilis è una flavoproteina recentemente identificata in seguito al sequenziamento completo del genoma di Bacillus subtilis. Il Dr. Molla si è occupato del clonaggio del gene codificante per questo enzima, della sovra-espressione in E. coli e della purificazione della proteina corrispondente. In seguito il Dr Molla si è occupato della caratterizzazione funzionale dell’enzima ricombinante determinandone il meccanismo cinetico attraverso una combinazione di tecniche di cinetica convenzionale e di cinetica allo stato prestazionario (spettrofotometria a stopped-flow). In questo modo ha dimostrato che il meccanismo cinetico della GO è sequenziale e che è simile a quello precedentemente determinato per la DAAO da lievito (anche se con differenti “rate limiting step”) portando ulteriori evidenze sulla somiglianza funzionale tra questi due enzimi. Recentemente il Dr. Molla ha partecipato alla determinazioine della struttura 3D di questo enzima (in collaborazione con il gruppo di cristallografia del Prof. Welte – Konstanz). I dati strutturali hanno permesso di classificare questo enzima nella sottofamiglia GR2 delle flavoproteine ossidasi. Attualmente l’attività di ricerca è focalizzata sulla determinazione del ruolo fisiologico di questo enzima attraverso approcci di tipo biochimico e microbiologico.

e) La pipecolato ossidasi umana è un importante enzima necessario per la degradazione della L-lisina nel cervello (attraverso la via dell’acido pipecolco); una bassa espressione di questo enzima è spesso associata a diverse malattie perossisomali (soprattutto di origine ereditaria). Il Dr. Molla si è occupato della messa a punto di un sistema di espressione in E. coli di questa proteina allo scopo di ottenerne una quantità sufficiente per procedere ad una sua caratterizzazione funzionale. La proteina è stata espressa in E. coli anche se in quantità piuttosto bassa; ciò è dovuto sia al basso livello di espressione che alla bassa solubilità della proteina stessa. Attualmente si stanno valutando diversi sistemi di espressione basati sulla produzione di proteine di fusione (con tioredossina, con la maltose binding protein, etc…).

f) Espressione in P. pastoris di proteine eucariotiche. Il Dr. Molla si è occupato, in via preliminare, della messa a punto di sistemi di espressione nel lievito Pichia pastoris di proteine ricombinanti quali la DAAO da R. gracilis, l’RNAsi umana 6PL e la proteina G72 umana. Ciò allo scopo di ottenere le proteine ricombinanti in quantità apprezzabile e, soprattutto, con le opportune modificazioni post-traduzionali che solo un organismo eucariote è in grado di fornire.

g) Il Dr. Molla si stà occupando dello studio delle proteine umane Prolina Ossidasi, D-aminoacido ossidasi e pLG72. E’ stato dimostrato da un punto di vista genetico che il prodotto del gene G72 sembra essere coinvolto nell’insorgere della schizofrenia; inoltre tale proteina (pLG72) interagisce con la DAAO umana, un enzima coinvolto nella regolazione del neuromodulatore D-serina a livello del sistema nervoso centrale. Il Dr. Molla si è occupato della progettazione del gene sintetico codificante per la G72, la sua sovra-espressione in E. coli e successiva purificazione. L’interazione tra le due proteine è stata studiata in dettaglio sia in vivo che in vitro; questi studi hanno recentemente permesso la pubblicazione di un modello di azione delle due proteine che potrebbe spiegare la loro funzione in condizioni fisiologiche e patologiche (per esempio in pazienti schizofrenici). Anche la proteina prolina ossidasi umana è stata correlata conla trasmissione dell’impulso glutamatergico e con la schizofrenia.

h) Studio dell'interazione Proteina-Ligando attraverso simulazioni al calcolatore delle interazioni intermolecolari. Nell’ambito di alcuni dei progetti elencati qui sopra il Dr. Molla si è occupato dello studio dell’interazione tra macromolecole e ligandi da un punto di vista teorico simulando tale processo in silicio tramite programmi di docking automatico (in particolare utilizzando il software Autodock4 che si basa su un approccio di Montecarlo Simulated Annealing).

i) Studio mediante un approccio combinato di cristallografia a raggi X, ingegneria proteica e analisi computazionale della modalità di diffusione dell’ossigeno all’interno di flavoproteine ossidasi (in particolare della D-amino acido ossidasi). Utilizzando lo xenon in cristallografia a raggi X si potranno evidenziare pathway di comunicazione tra l’esterno della proteina e il sito attivo a disposizione per la diffusione dell’ossigeno. Le stesse pathway verranno identificate mediante un approccio combinato di dinamica molecolare e “implicit ligand analysis”.

l) In parallelo a questi aspetti di ricerca di base il Dr. Molla ha sviluppato, in stretta collaborazione con la Prof.ssa Pilone ed il Prof. Pollegioni, ricerche per applicazioni biotecnologiche della DAAO da lievito e della Acilasi da Pseudomonas. Tali ricerche sono state anche supportate da finanziamenti da parte di industrie mediante contratti stipulati inizialmente con la prof.ssa Pilone quale responsabile scientifico e successivamente con il Prof. Pollegioni.

1) In particolare il Dr. Molla ha condotto la ricerca di mutanti della D-aminoacido ossidasi da lievito (mediante mutagenesi sito diretta ed evoluzione in vitro) più adatte ad impieghi biotecnologici (per esempio per la realizzazione di biosensori per D-aminoacidi)

2) Sono stati inoltre messi a punto processi di fermentazione per la produzione di DAAO per un utilizzo industriale.

3) Sintesi del gene, espressione in E. coli, mutagenesi sito specifica e “random” e di una CefalosporinaC acilasi da pseudomonas per la sintesi di antibiotici semisintetici.

4) Clonaggio da Bacillus subtilis ed espressione in E. coli di enzimi proteolitici di interesse industriale.

5) L-aminoacido ossidasi

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Pubblicazioni in evidenza

2016

Cappelletti P, Binda E, Tunesi M, Albani D, Giordano C, Molla G, Pollegioni L. Recombinant human Tat-Hsp70-2: A tool for neuroprotection. Protein Expr Purif. 2016 Jul 9. pii: S1046-5928(16)30132-2. doi: 10.1016/j.pep.2016.07.005. [Epub ahead of print] PubMed PMID: 27405095. Birolo L, Sacchi S, Smaldone G, Molla G, Leo G, Caldinelli L, Pirone L, Eliometri P, Di Gaetano S, Orefice I, Pedone E, Pucci P, Pollegioni L. Regulating levels of the neuromodulator d-serine in human brain: structural insight into pLG72 and d-amino acid oxidase interaction. FEBS J. 2016 Sep;283(18):3353-3370. doi: 10.1111/febs.13809. Epub 2016 Aug 5. PubMed PMID: 27400736. Motta P, Molla G, Pollegioni L, Nardini M. Structure-Function Relationships in l-Amino Acid Deaminase, a Flavoprotein Belonging to a Novel Class of Biotechnologically Relevant Enzymes. J Biol Chem. 2016 May 13;291(20):10457-75. doi: 10.1074/jbc.M115.703819. Epub 2016 Mar 28. PubMed PMID: 27022028; PubMed Central PMCID: PMC4865898.

2015

1. Cappelletti P, Piubelli L, Murtas G, Caldinelli L, Valentino M, Molla G, Pollegioni L, Sacchi S. Structure-function relationships in human d-amino acid oxidase variants corresponding to known SNPs. Biochim Biophys Acta. 2015 Feb 17. pii: S1570-9639(15)00041-2. doi: 10.1016/j.bbapap.2015.02.005. [Epub ahead of print] PubMed PMID: 25701391.

2014

2. Nicolia A, Ferradini N, Molla G, Biagetti E, Pollegioni L, Veronesi F, Rosellini D. Expression of an evolved engineered variant of a bacterial glycine oxidase leads to glyphosate resistance in alfalfa. J Biotechnol. 2014 Jun 4. pii:S0168-1656(14)00266-1. doi: 10.1016/j.jbiotec.2014.05.020. [Epub ahead of print] PubMed PMID: 24905148.

3. Rosini E, Piubelli L, Molla G, Frattini L, Valentino M, Varriale A, D'Auria S, Pollegioni L. Novel biosensors based on optimized glycine oxidase. FEBS J. 2014 Aug;281(15):3460-72. doi: 10.1111/febs.12873. Epub 2014 Jul 1. PubMed PMID: 24925096.

4. Conti G, Pollegioni L, Molla G, Rosini E. Strategic manipulation of an industrial biocatalyst - evolution of a cephalosporin C acylase. FEBS J. 2014 May;281(10):2443-55. doi: 10.1111/febs.12798. Epub 2014 Apr 22. PubMed PMID:24684708.

5. Molla G, Nardini M, Motta P, D'Arrigo P, Panzeri W, Pollegioni L. Aminoacetone oxidase from Streptococcus oligofermentans belongs to a new three-domain family of bacterial flavoproteins. Biochem J. 2014 Dec 15;464(3):387-99. doi: 10.1042/BJ20140972. PubMed PMID: 25269103. 4.779

2013

6. Hopkins SC, Heffernan ML, Saraswat LD, Bowen CA, Melnick L, Hardy LW, Orsini MA, Allen MS, Koch P, Spear KL, Foglesong RJ, Soukri M, Chytil M, Fang QK, Jones SW, Varney MA, Panatier A, Oliet SH, Pollegioni L, Piubelli L, Molla G, Nardini M, Large TH. Structural, Kinetic, and Pharmacodynamic Mechanisms of d-Amino Acid Oxidase Inhibition by Small Molecules. J Med Chem. 2013 May 9;56(9):3710-24.

7. Pollegioni L, Rosini E, Molla G. Cephalosporin C acylase: dream and(/or) reality. Appl Microbiol Biotechnol. 2013 Mar;97(6):2341-55. 3.881

8. Golden E, Paterson R, Tie WJ, Anandan A, Flematti G, Molla G, Rosini E, Pollegioni L, Vrielink A. Structure of a class III engineered cephalosporin acylase: comparisons with class I acylase and implications for differences in substrate specificity and catalytic activity. Biochem J. 2013 Apr 15;451(2):217-26. 4.779

9. Bifulco D, Pollegioni L, Tessaro D, Servi S, Molla G. A thermostable L-aspartate oxidase: a new tool for biotechnological applications. Appl Microbiol Biotechnol. 2013;97(16):7285-95. 3.881

10. Caldinelli L, Sacchi S, Molla G, Nardini M, Pollegioni L. Characterization of human DAAO variants potentially related to an increased risk of schizophrenia. Biochim Biophys Acta. 2013 Mar;1832(3):400-10.

11. Sacchi S, Rosini E, Pollegioni L, Molla G. D-amino acid oxidase inhibitors as a novel class of drugs for schizophrenia therapy. Curr Pharm Des. 2013;19(14):2499-511.

12. Pollegioni L, Motta P, Molla G. L-amino acid oxidase as biocatalyst: a dream too far? Appl Microbiol Biotechnol. 2013 Nov;97(21):9323-41. 3.881

2012

13. Sacchi S, Caldinelli L, Cappelletti P, Pollegioni L, Molla G.Structure-function relationships in human D-amino acid oxidase. Amino Acids. 2012Nov;43(5):1833-50 3.914

14. Tallarita E, Pollegioni L, Servi S, Molla G. Expression in Escherichia coli of the catalytic domain of human proline oxidase. Protein Expr Purif. 2012 Feb 8;82(2):345-351

2011

15. Ghisla S, Pollegioni L, Molla G. Revisitation of the βCl-elimination reaction of D-amino acid oxidase: new interpretation of the reaction that sparked flavoprotein dehydrogenation mechanisms. J Biol Chem. 2011 Nov 25;286(47):40987-98. Epub 2011 Sep 23. 4.773

16. Pollegioni L, Molla G. New biotech applications from evolved D-amino acid oxidases. Trends Biotechnol. 2011 Jun;29(6):276-83. Epub 2011 Mar 10. Review. 9.148

17. Rosini E, Molla G, Ghisla S, Pollegioni L. On the reaction of D-amino acid oxidase with dioxygen: O2 diffusion pathways and enhancement of reactivity. FEBS J. 2011 Feb;278(3):482-92.

18. Tallarita, E.; Molla, G.; Servi, S.; Pollegioni, L. Characterization of deletion variants of human recombinant proline oxidase, an enzyme related to schizophrenia susceptibility FEBS JOURNAL, 278, Special SI, 276-277, Supplement: 1, JUN 2011

2010

19. Volonte F, Pollegioni L, Molla G, Frattini L, Marinelli F, Piubelli L. Production of recombinant cholesterol oxidase containing covalently bound FAD in Escherichia coli. BMC Biotechnol. 2010 Apr 21;10(1):33.

20. Caldinelli L, Molla G, Bracci L, Lelli B, Pileri S, Cappelletti P, Sacchi S, Pollegioni L. Effect of ligand binding on human D-amino acid oxidase: implications for the development of new drugs for schizophrenia treatment. Protein Sci. 2010 Aug;19(8):1500-12.

21. Saam J, Rosini E, Molla G, Schulten K, Pollegioni L, Ghisla S. O2 reactivity of flavoproteins: dynamic access of dioxygen to the active site and role of a H+ relay system in D-amino acid oxidase. J Biol Chem. 2010 Aug 6;285(32):24439-46. 5.328

22. Frattini LF, Piubelli L, Sacchi S, Molla G, Pollegioni L. Is rat an appropriate animal model to study the involvement of D-serine catabolism in schizophrenia? Insights from characterization of D-amino acid oxidase. FEBS J. 2011 Nov;278(22):4362-73.

23. Molla G, Piubelli L, Volontè F, Pilone MS. Enzymatic detection of D-amino acids. Methods Mol Biol. 2012;794:273-89. PubMed PMID: 21956570.

24. Volontè F, Pisanelli I, D'Arrigo P, Viani F, Molla G, Servi S, Pollegioni L. Overexpression of a bacterial chymotrypsin: application for L-amino acid ester hydrolysis. Enzyme Microb Technol. 2011 Dec 10;49(6-7):560-6

2009

25. Pedotti M, Ghisla S, Motteran L, Molla G, Pollegioni L (2009) Catalytic and redox properties of glycine oxidase from Bacillus subtilis. Biochimie. 91(5):604-12.

26. Caldinelli L, Molla G, Sacchi S, Pilone MS, Pollegioni L (2009) Relevance of weak flavin binding in human D-amino acid oxidase. Protein Sci. 18(4):801-10

27. Romano D, Molla G, Pollegioni L, Marinelli (2009) Optimization of human d-amino acid oxidase expression in Escherichia coli. Protein Expr Purif. [Epub ahead of print].

28. Rosini E, Pollegioni L, Ghisla S, Orru R, Molla G. Optimization of D-amino acid oxidase for low substrate concentrations--towards a cancer enzyme therapy. FEBS J. 2009 Sep;276(17):4921-32. Epub 2009 Aug 4. PubMed PMID: 19694805 3.042

29. Caldinelli L, Pedotti M, Motteran L, Molla G, Pollegioni L. FAD binding in glycine oxidase from Bacillus subtilis. Biochimie. 2009 Nov-Dec;91(11-12):1499-508. Epub 2009 Sep 12.

30. Pollegioni L, Piubelli L, Molla G. Cholesterol oxidase: biotechnological applications. FEBS J. 2009 Oct 16.

31. Pedotti M, Rosini E, Molla G, Moschetti T, Savino C, Vallone B, Pollegioni L. Glyphosate resistance by engineering the flavoenzyme glycine oxidase. J Biol Chem. 2009 Dec 25;284(52):36415-23. 5.328

2008

32. Pollegioni L, Molla G, Sacchi S, Rosini E, Verga R, Pilone MS. (2008) Properties and applications of microbial D-amino acid oxidases: current state andperspectives. Appl Microbiol Biotechnol 78(1):1-16. Review.

33. Caldinelli L, Iametti S, Barbiroli A, Fessas D, Bonomi F, Piubelli L, Molla G, Pollegioni L. (2008) Relevance of the flavin binding to the stability and folding of engineered cholesterol oxidase containing noncovalently bound FAD. Protein Sci. 17(3):409-19.

34. Caligiuri A, D’Arrigo P, Rosini E, Pedrocchi-Fantoni G, Tessaro D, Molla G, Servi S, Pollegioni L. (2008) Activity of yeast D-amino acid oxidase on aromatic unnatural amino acids J. Mol. Catal. B – Enzymatic 50(2-4):93-98

35. Sacchi S, Bernasconi M, Martineau M, Mothet JP, Ruzzene M, Pilone MS, Pollegioni L, Molla G. (2008) pLG72 modulates intracellular D-serine levels through its interaction withD-amino acid oxidase: Effect on schizophrenia susceptibility. J Biol Chem 283(32):22244-56 5.52

36. Volontè F, Marinelli F, Gastaldo L, Sacchi S, Pilone MS, Pollegioni L, Molla G. (2008) Optimization of glutaryl-7-aminocephalosporanic acid acylase expression in E.coli. Protein Expr Purif. May 28. [Epub ahead of print] PMID: 18586517

37. Rosini E, Molla G, Rossetti C, Pilone MS, Pollegioni L, Sacchi S. (2008) A biosensor for all D-amino acids using evolved d-amino acid oxidase. J Biotechnol. 135(4):377-84.

38. Piubelli L, Pedotti M, Molla G, Feindler-Boeckh S, Ghisla S, Pilone MS, Pollegioni L. (2008) On the oxygen reactivity of flavoprotein oxidases: An oxygen access tunnel and gate in Brevibacterium sterolicum cholesterol oxidase. J Biol Chem. 283(36):24738-47.

2007

39. Boselli A, Piubelli L, Molla G, Pilone MS, Pollegioni L, Sacchi S. (2007) Investigating the role of active site residues of Rhodotorula gracilis D-aminoacid oxidase on its substrate specificity. Biochimie 89(3):360-8.

40. Pollegioni L, Piubelli L, Sacchi S, Pilone MS, Molla G. (2007) Physiological functions of D-amino acid oxidases: from yeast to humans. Cell Mol Life Sci. 64(11):1373-94. Review.

41. Boselli A, Rosini E, Marcone GL, Sacchi S, Motteran L, Pilone MS, Pollegioni L, Molla G. (2007) Glycine oxidase from Bacillus subtilis: role of histidine 244 and methionine 261. Biochimie 89(11):1372-80.

42. Sacchi S, Pollegioni L, Bernasconi M, Pilone L, Mothet JP, Molla G. (2007) Molecular basis of schizophrenia: functional investigation of human D-amino acid oxidas-pLG72 interaction. J. Neurochemistry 101: 36 4.45

43. Kay CW, El Mkami H, Molla G, Pollegioni L, Ramsay RR. (2007) Characterization of the covalently bound anionic flavin radical in monoamineoxidase a by electron paramagnetic resonance. J Am Chem Soc. 129(51):16091-7. 7.89

44. Pollegioni L, Sacchi S, Caldinelli L, Boselli A, Pilone MS, Piubelli L, Molla G. (2007) Engineering the properties of D-amino acid oxidases by a rational and a directed evolution approach. Curr Protein Pept Sci. 8(6):600-18. Review.

2006

45. Sacchi S, Boselli A, Job V, Pilone MS, Pollegioni L, Molla G (2006) The role of tyrosines 223 and 238 in Rhodotorula gracilis D-amino acid oxidase catalysis: interpretatioon of double mutations. Enzyme and Microbial Technology. 38(6):795-802

46. Molla G, Sacchi S, Bernasconi M, Pilone MS, Fukui, K, Pollegioni L (2006) Characterization of human D-amino acid oxidase. FEBS letters 580(9):2358-2364

47. Molla G, Bernasconi M, Sacchi S, Pilone MS, Pollegioni L. (2006) Expression in Escherichia coli and in vitro refolding of the human protein pLG72. Protein Expr Purif. 46(1):150-5.

48. Caldinelli L, Molla G, Pilone MS, Pollegioni L. (2006) Tryptophan 243 affects interprotein contacts, cofactor binding and stability in D-amino acid oxidase from Rhodotorula gracilis. FEBS J. 273(3):504-12.

49. Caligiuri A, D’Arrigo P, Geffault T, Molla G, Pollegioni L, Rosini E, Rossi E, Servi S. (2006) Multistep enzyme catalysed deracemisation of 2-naphthyl alanine. Biocatalysis and Biotransformations. 24 (6):409-413

50. Caligiuri A, D’Arrigo P, Rosini E, Tessaro D, Molla G, Servi S, Pollegioni L. (2006) Enzymatic conversion of unnatural amino acids by yeast D-amino acid oxidase. Advanced Synthesis and Catalysis 348 (15):2183-2190 4.762

51. Lim L, Molla G, Guinn N, Ghisla S, Pollegioni L, Vrielink A. (2006) Structural and kinetic analyses of the H121A mutant of cholesterol oxidase. Biochem J. 400(1):13-22.

2005

52. Caldinelli L, Iametti S, Barbiroli A, Bonomi F, Fessas D, Molla G, Pilone MS, Pollegioni L (2005) Dissecting the structural determinants of the stability of cholesterol oxidase containing covalently bound flavin. J Biol Chem. 280(24):22572-81

53. Pollegioni L, Lorenzi S, Rosini E, Marcone GL, Molla G, Verga R, Cabri W, Pilone MS. (2005) Evolution of an acylase active on cephalosporin. C. Protein Sci. 14(12):3064-76.

2004

54. Pollegioni L, Caldinelli L, Molla G, Sacchi S, Pilone MS (2004) Catalytic properties of D-amino acid oxidase in cephalosporin C bioconversion: a comparison between proteins from different sources Biotechnol Prog., 20(2):467-73.

55. Mortl M, Diederichs K, Welte W, Molla G, Motteran L, Andriolo G, Pilone MS, Pollegioni L (2004) Structure-function correlation in glycine oxidase from bacillus subtilis. J. Biol. Chem. 279(28): 29718-27 6.355

56. Boselli A, Piubelli L, Molla G, Rosini E, Pilone MS, Ghisla S, Pollegioni L (2004) On the mechanism of Rhodotorula gracilis D-amino acid oxidase: role of the active site serine 335 Biochim Biophys Acta, 1702(1):19-32

57. Sacchi S, Rosini E, Molla G, Pilone MS, Pollegioni L Modulating D-amino acid oxidase substrate specificity: production of an enzyme for analytical determination of all D-amino acids by directed evolution (2004) Protein Eng Des Sel, 17(6):517-25

2003

58. Molla G, Motteran L, Job V, Pilone MS, Pollegioni L (2003) Kinetic mechanisms of glycine oxidase from Bacillus subtilis. Eur J Biochem. 270(7):1474-82. 3.001

59. Molla G, Motteran L, Piubelli L, Pilone MS, Pollegioni L (2003) Regulation of D-amino acid oxidase expression in the yeast Rhodotorula gracilis. Yeast., 20(12):1061-9.

60. Piubelli L, Molla G, Caldinelli L, Pilone MS, Pollegioni L Dissection of the structural determinants involved in formation of the dimericform of D-amino acid oxidase from Rhodotorula gracilis: role of the size of the βF5-βF6 loop. (2003) Protein Eng., 16(12):1063-9.

2002

61. Job V, Molla G., Pilone MS, Pollegioni L (2002) Overexpression of a recombinant wild-type and His-tagged Bacillus subtilis glycine oxidase in Escherichia coli Eur. J. Biochem. 269, 1456-63

62. Sacchi S, Lorenzi S., Molla G., Pilone MS., Rossetti C, Pollegioni L. (2002) Engineering the substrate specificity of D-amino-acid oxidase J. Biol. Chem. 277, 27510-6 6.696

63. Piubelli L, Caldinelli L, Molla G., Pilone MS, Pollegioni L. (2002) Conversion of the dimeric D-amino acid oxidase from Rhodotorula gracilis to a monomeric form. A rational mutagenesis approach FEBS Lett., 526, 43-8.

64. Pollegioni L, Diederichs K, Molla G, Umhau S, Welte W, Ghisla S, Pilone MS. (2002) Yeast D-amino acid oxidase: structural basis of its catalytic properties. J. Mol. Biol. 324, 535-46. 5.359

2001

65. Motteran L, Pilone MS., Molla G., Ghisla S, Pollegioni L Cholesterol oxidase from Brevibacterium sterolicum. The relationship between covalent flavinylation and redox properties (2001) J. Biol. Chem. 276, 18024-30

66. Pollegioni L, Harris CM, Molla G, Pilone MS, Ghisla S. Identification and role of ionizing functional groups at the active center of Rhodotorula gracilis D-amino acid oxidase (2001) FEBS Lett. 507, 323-6.

2000

67. Molla G, Porrini D, Job V, Motteran L, Vegezzi C, Campaner S, Pilone MS, Pollegioni L (2000) Role of Arginine285 at the active site of Rhodotorula gracilis D-amino acid oxidase J. Biol. Chem. 275: 24715 7.397

68. Umhau S, Pollegioni L, Molla G, Diederichs K, Welte W, Pilone MS, Ghisla S (2000) The x-ray structure of D-amino acid oxidase at very high resolution identifies the chemical mechanism of flavin dependent substrate dehydrogenation Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97, 12463 10.789

69. Pollegioni L, Porrini D, Molla G, Pilone MS Redox potentials and their pH dependence in Rhodotorula gracilis and trigonopsis variabilis D-amino acid oxidase (2000) Eur. J. Biochem. 267, 6624

1999

70. Harris CM, Molla G, Pilone MS, Pollegioni L (1999) Studies on the reaction mechanism of Rhodotorula gracilis D-amino acid oxidase: Role of the highly conserved Tyr223 on substrate binding and catalysis J.Biol.Chem. 274: 36233

1998

71. Molla G, Vegezzi C, Pilone MS, Pollegioni L (1998) Overexpression in Echerichia coli of a Recombinant Chimeric Rhodotorula gracilis D-Amino Acid Oxidase. Protein Expression and Purification 14: 289

1997

72. Pollegioni L, Molla G, Campaner S, Martegani E, Pilone MS (1997) Cloning, sequencing and expression in E. coli of a D-amino acid oxidase cDNA from R. gracilis active on cephalosporin C. J. Biotechnol., 58/2: 115